ПЦР на ВИЧ: суть метода, его достоверность и точность

Методика ПЦР-диагностирования первоначально была разработана 35 лет назад американским ученым Кари Муллисом. Изобретатель исследования получил международную Нобелевскую награду в 1993 году за свое новаторство. Оно стало незаменимым для любой лабораторной деятельности.

исследование крови на ВИЧ методом ПЦР

ПЦР используется в молекулярной биологии, чтобы произвести множество копий (амплифицировать) небольших участков ДНК.  ДНК-полимераза может добавлять нуклеотид только в существовавшую ранее 3-OH-группу. Поэтому ему нужен праймер, к которому он может добавить первый нуклеотид. Это требование позволяет определить конкретный участок последовательности шаблонов, который необходимо диагностировать. В конце реакции ПЦР конкретная последовательность будет накапливаться в миллиардах копий (ампликонов).

ПЦР включает в себя процесс нагрева и охлаждения, называемый термическим циклом, который выполняется специализированной техникой. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является относительно простой методикой. Она усиливает ДНК-матрицу для получения специфических фрагментов ДНК in vitro (анализ в пробирке). Традиционные методы клонирования последовательности ДНК в векторе и ее репликации в живой клетке часто требуют проведения исследований от нескольких дней до нескольких недель работы. Но получить результаты амплификации последовательностей ДНК с помощью ПЦР можно спустя пару часов. 

определение фрагмента ДНК

Большинство биохимических анализов, используемых в диагностике инфекционных заболеваний, требуют достаточно большого количества биологического материала. Для ПЦР данное условие не является обязательным. Таким образом, ПЦР может обеспечить более чувствительное обнаружение патогена. И более высокие уровни амплификации определенных последовательностей за меньшее время с достаточно ограниченным количеством биоматериала. Эти особенности делают технику чрезвычайно полезной. Не только в фундаментальных исследованиях, но и в личных целях. Включая тестирование генетической идентичности, судебную экспертизу, промышленный контроль качества.

Основная ценность анализа заключается в возможности выявления патологий, передаваемых половым путем, до развития первых признаков. К анализу методом ПЦР прибегают при необходимости ранней диагностики ВИЧ-инфекции. А также определения РНК вируса в крови донора. Благодаря высокой чувствительности анализа получить ответ можно спустя 7-14 дней после предполагаемого инфицирования. Достоверность диагностики будет достигать от 85 до 98%. Однако, тест ПЦР назначается не всем. Поскольку является достаточно дорогостоящим исследованием. Главное, требует наличия дорогого оборудования и определенных профессиональных навыков от сотрудников лаборатории. Если пациент ранее не находился в ситуациях, связанных с повышенным риском заражения, проведение полимеразной реакции не целесообразно.

Полимеразная реакция качественного типа на ВИЧ

Проведение качественного ПЦР на ВИЧ позволяет определить присутствие в организме вирусного заболевания. Пациент может получить результат в виде следующих отметок: положительный, ложноположительный, отрицательный. Но исследование не дает возможности определить количество копий ретровируса. Качественный анализ не проводится пациентам, у которых ранее была диагностирования инфекция. Не назначается в качестве контроля над эффективностью противовирусной терапии.

ПЦР количественного типа на ВИЧ

Проводится с целью определения копий РНК вируса в биологическом материале пациента. Количественный ПЦР назначается только больным с ранее выявленной инфекцией, как мониторинг проводимого лечения. 

ПЦР исследование количественного типа

ПЦР в реальном времени 

Используется в лабораторной диагностике для образования копий участков ДНК. Также для одновременного количественного исследования и детекции последовательности ДНК в биоматериале. По сути, диагностика представляет собой количественный ПЦР. 

На заметку!

В различных лабораториях можно встретить несколько формулировок диагностики: «ПЦР количественное определение» и «ПЦР в режиме Real-time».

Оба анализа являются идентичными.

Записаться на прием к специалистам

Взятие материала для диагностики ВИЧ 

Забор биологического материала для проведения диагностики ВИЧ с помощью ПЦР проводится согласно определенным стандартам. Манипуляция проводится в процедурном кабинете. Используются одноразовые стерильные инструменты. Вскрытие пакета с инструментами проводится непосредственно возле пациента. Собранный материал помещается в стерильные пробирки, предварительно обработанные CrO3 (хромовая смесь).   В качестве биологического материала выступает венозная кровь, которая сдается в утреннее время и на голодный желудок. За несколько дней до сдачи анализа следует исключить употребление алкоголя, жирной и острой пищи, прекратить прием медикаментозных препаратов.

запрет на медикаменты

Если отменить лекарственные средства невозможно, об этом следует сообщить до проведения анализа. 

Дополнительно может быть взят мазок из уретры и влагалища, для выявления сопутствующих заболеваний, передающихся половым путем.  Исследование проводится анонимно, результаты пациент получает лично в руки. При себе рекомендуется иметь удостоверение личности.

Через сколько времени можно сдавать ПЦР на ВИЧ

Выявить наличие ВИЧ-вируса возможно спустя 4-6 дней после инфицирования. В данном случае информативность анализа будет достигать 85%. Спустя 10-13 дней анализ может определить заболевание с точностью до 98%. Отрицательный результат будет верен только при условии его сдачи не ранее, чем спустя 2 недели после предполагаемого заражения.

Причины ложноположительного результата 

Получить ложноположительный результат достаточно сложно.

неожиданный результат

Такое возможно при несоблюдении правил забора биологического материала, неправильной маркировки пробирки, использования некачественной тест-системы и других подобных факторов. В остальных случаях шанс получения подобного результата составляет не более 2%.

Через сколько времени можно получить результаты анализа? 

Если смотреть с технической стороны, результаты ПЦР можно получить в течение 4 часов. Однако на практике пациент лабораторное заключение получает от одного до нескольких дней. В целом, сроки проведения зависят от загруженности лаборатории и от того, насколько организованно построена ее работа. 

Проведение полимеразной реакции у новорожденного 

ПЦР назначается в случае, когда ребенок рожден от ВИЧ-положительной матери. Проведение ИФА в данном случае не информативно. Поскольку у ребенка примерно до 2 лет сохраняются антитела против ретровируса. По этой причине иммуноферментное исследование не даст точного ответа.  При проведении ПЦР у ребенка возрастом 4-6 недель и получении положительного результата речь будет идти о заражении.

забор крови на ПЦР у ребенка

Если ПЦР, проведенный в возрасте от 8 недель до полугода, показывает отрицательные результаты (при условии, что ребенок не питался грудным молоком матери) инфицирование исключается.

Почему для определения ВИЧ ПЦР лучше ИФА? 

Полимеразная реакция позволяет выявить РНК вируса, его наличие в организме, в том числе количественное. Задача ИФА заключается в определении антител к ВИЧ-инфекции. Иммуноферментный анализ относительно определения возможного инфицирования не уступает ПЦР, его точность достигает 99%. Однако, в отличии от ПЦР — не способен определить заболевание на ранних стадиях его развития.

Преимущества проведения ПЦР на ВИЧ

  • Полимеразная реакция непосредственно определяет наличие инфекционного агента. К примеру, ИФА может выявить исключительно антитела и продукты жизнедеятельности микроорганизма.
  • Анализ четко идентифицирует конкретный патогенный микроорганизм, даже при условии наличия нескольких перекрестно реагируемых. 
  • Методика позволяет исследовать любой вид биологического материала, в том числе засохшие капли крови. 

Из недостатков ПЦР можно выделить повышенную чувствительность анализа. Это иногда становится причиной получения ложноположительного результата. Такое происходит в случае присутствия в пробирке или на инструментах хотя бы незначительного количества постороннего ДНК.

Диагностика ВИЧ с помощью ПЦР и ИФА: расшифровка, достоверность результатов 

Иммуноферментный анализ, при котором результаты тестирования указывают на отсутствие в организме антител к ВИЧ и антигена р24, является отрицательным. В случае наличия данных молекул — выдается положительное диагностическое заключение.  В ряде случаев пациент может получить ложноположительный или ложноотрицательный результат. Подобное является следствием раннего срока беременности, наличия герпетической инфекции, некорректно проведенного забора материала, нарушения транспортировки пробирок. Кроме того, подобные результаты встречаются у пациентов с протекающими аутоиммунными заболеваниями и гепатитами различного типа. Может проводиться Western Blot (иммунный блоттинг), который сочетает в себе ИФА и разделение белков вируса.

иммуноблоттинг в лаборатории

Тогда положительный результат будет при наличии гликопротеида вирусной инфекции gp160. Он является предшественником гликопротеинов оболочки ВИЧ gp41 и gp120. Если данные молекулы отсутствуют, заключение лабораторного исследования считается отрицательным. Проведение Western Blot в сочетании с ИФА позволяет получить результаты, достоверность которых превышает 98%. В случае, когда ИФА положительный, а Western Blot отрицательный — тестирование считается сомнительным и требует проведения ПЦР.

Поставьте оценку статье: 
Голосов пока нет