Анализ на сифилис РПГА

кровь для анализа на РПГА к сифилису

 

В диагностике сифилиса, ключевую роль играют лабораторные исследования.

 

Широкое распространение в дерматовенерологии получил анализ на сифилис РПГА – реакция пассивной гемагглютинации. В свое время, это исследование было настоящим золотым стандартом в серологической диагностике. Не утратило оно актуальность и в наше время.

Общая характеристика РПГА

Эта реакция была изобретена еще в 1965 году. По классификации, относится к непрямым трепонемным пробам, которые позволяют только косвенно судить о наличии возбудителя в организме пациента. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Принцип непрямой гемагглютинации основан на том, что белки (антигены) бледной трепонемы заранее абсорбированы на эритроцитах какого-либо животного или птицы. Если эту «меченую» сыворотку смешать с плазмой крови больного, то антитела пациента распознают свою мишень и сработают: эритроциты склеятся (агглютинируют) боковыми сторонами.

склеивание эритроцитов для РПГА к сифилису

У здорового человека такой реакции не произойдет. Красные кровяные тельца играют здесь только сигнальную роль. Благодаря им, результат можно оценить даже без микроскопа.

Исследуемый материал для анализа РПГА

Антитела к бледной трепонеме содержатся практически во всех биологических жидкостях больного человека.

Для анализа используются такие:

  • Венозная кровь, а точнее – отцентрифугированная плазма.
  • Спинномозговая жидкость (ликвор). Берется при подозрении на нейросифилис.
  • Капиллярная кровь из пальца.

Забор крови проводят утром натощак, чтоб всосавшиеся в кровь жиры пищи не испортили образец.

Для получения достоверных результатов нужно соблюсти ряд требований:

  • Набирают кровь в чистую сухую пробирку или вакутайнер без добавления антикоагулянтов.
  • Полученный материал помещают в термостат на 30-60 минут при 37°С.

использование термостата для РПГА к сифилису

  • Затем переносят на 1-1,5 часа в температуру 4°С.
  • Получившийся сгусток центрифугируют 15 минут на 1000 об/мин.

Образец расслаивается на плазму и форменные элементы. Жидкую часть берут в работу как можно быстрее, чтоб не наступил распад антител. Если необходимо, плазму допускается хранить до 5 суток в холодильнике при температуре от 2 до 8°С. Можно только один раз заморозить до -20°С и хранить не более 6 недель. Ликвор нужно исследовать максимально быстро. Его берут в работу прямо от больного – предварительная подготовка не требуется.

Современные тесты для проведения РПГА

Сейчас для проведения РПГА пользуются стандартизированными тест-наборами.

В них есть все необходимое для анализов:

  • Флакон с эритроцитами, которые на поверхности содержат антигены бледной трепонемы штамма Nichols.
  • Такая же емкость, но уже с «чистыми» красными кровяными тельцами (нужны для контроля).
  • Буферный раствор для разведения сыворотки пациента (ниже расскажем, зачем это делают).
  • Сыворотка от человека, заведомо больного сифилисом, тоже используется для контроля (К+).
  • Сыворотка от заведомо здорового человека (К–).
  • Пластиковая планшетка с пронумерованными луночками для смешивания образцов и оценки результатов.

лунки пронумерованные для РПГА

Каждый тест набор содержит запас реактивов для постановки определенного числа проб. Обычно – 100. Поэтому сыворотку иногда сохраняют, пока не наберется нужное число образцов для исследования.

Методика проведения анализа РПГА

Реакция пассивной гемагглютинации может предоставить два типа результатов:

  • Качественный. Дает ответ на вопрос, есть ли в исследуемом образце антитела к возбудителю.
  • Количественный. Позволяет оценить интенсивность синтеза иммуноглобулинов и таким образом отследить активность инфекции.

Как правило, сначала проводится качественная оценка, а положительные образцы отбираются для количественных исследований.

Алгоритм простого выявления инфицированности таков:

  • В лунки планшета вносятся одинаковые дозы исследуемых образцов. На одного пациента выделяется ряд из шести лунок.
  • В первые две капают его плазму, разведенную буфером 1:20.
  • Следующая пара служит для контроля, в нее помещают сыворотку К+. И еще две лунки для материала К–.
  • Затем вносят меченные антигеном эритроциты в первую лунку из каждой пары. Во вторую – эритроциты чистые.
  • Планшет некоторое время покачивают для тщательного перемешивания реактивов и оставляют в покое. Минимум – 45 минут. Можно и на всю ночь.

Результаты оцениваются визуально. Если реакция отрицательная, эритроциты оседают на дно сферического углубления лунки.

кровь на сифилис в лунках

Это должно произойти в обеих лунках с образцами пациента и там, куда были добавлены чистые контрольные эритроциты тест-системы.

При положительном результате, эритроциты не собираются в одном месте, а равномерно распределены по всему дну лунки. Подобная картина должна быть там, где меченые стандартным антигеном эритроциты смешиваются с образцом больного и сывороткой К+. Таким образом проводится контроль реакции, что позволяет избежать ложных результатов.

Количественная оценка РПГА

Образцы с положительным результатом отбирают и несколько раз разводят буферным раствором (титруют). Перед каждым разведением, сыворотку капают в соответствующую лунку планшета и отмечают над ней степень суммарного разведения. Затем к образцам добавляют эритроциты с антигеном трепонемы и определяют, при каком титре еще отмечается положительный результат. Это – количественный анализ крови на сифилис РПГА, он показывает концентрацию антител к возбудителю.

Результаты оценивают так:

  • 4+ означает, что эритроциты выстилают дно лунки равномерным слоем. Появление складчатости края говорит о высоких концентрациях антител в исследуемом образце. Реакция положительная.
  • 3+ ставят, если круг четкий, но часть эритроцитов «стекает» к центру. Картина напоминает расправленный зонтик, расценивается как положительная реакция.

количественный РПГА на сифилис

  • 2+ выглядит как широкое кольцо с тенденцией к просветлению в центре. Слабоположительная.
  • 1+ означает сомнительный результат. В лунке – узкое колечко. Требует повтора через 1-2 недели.
  • При отрицательном анализе, эритроциты формируют пуговку в центре лунки.

Есть, правда, серорезистентные случаи сифилиса, при которых болезни уже вроде бы нет, а антитела сохраняются длительное время. Поэтому РПГА иногда требует подтверждения другими методами.

При необходимости сдать РПГА и пройти любое обследование на сифилис, обращайтесь к грамотным венерологам.