Современные тесты для проведения РПГА
Сейчас для проведения РПГА пользуются стандартизированными тест-наборами.
В них есть все необходимое для анализов:
- Флакон с эритроцитами, которые на поверхности содержат антигены бледной трепонемы штамма Nichols.
- Такая же емкость, но уже с «чистыми» красными кровяными тельцами (нужны для контроля).
- Буферный раствор для разведения сыворотки пациента (ниже расскажем, зачем это делают).
- Сыворотка от человека, заведомо больного сифилисом, тоже используется для контроля (К+).
- Сыворотка от заведомо здорового человека (К–).
- Пластиковая планшетка с пронумерованными луночками для смешивания образцов и оценки результатов.
Каждый тест набор содержит запас реактивов для постановки определенного числа проб. Обычно – 100. Поэтому сыворотку иногда сохраняют, пока не наберется нужное число образцов для исследования.
Методика проведения анализа РПГА
Реакция пассивной гемагглютинации может предоставить два типа результатов:
- Качественный. Дает ответ на вопрос, есть ли в исследуемом образце антитела к возбудителю.
- Количественный. Позволяет оценить интенсивность синтеза иммуноглобулинов и таким образом отследить активность инфекции.
Как правило, сначала проводится качественная оценка, а положительные образцы отбираются для количественных исследований.
Алгоритм простого выявления инфицированности таков:
- В лунки планшета вносятся одинаковые дозы исследуемых образцов. На одного пациента выделяется ряд из шести лунок.
- В первые две капают его плазму, разведенную буфером 1:20.
- Следующая пара служит для контроля, в нее помещают сыворотку К+. И еще две лунки для материала К–.
- Затем вносят меченные антигеном эритроциты в первую лунку из каждой пары. Во вторую – эритроциты чистые.
- Планшет некоторое время покачивают для тщательного перемешивания реактивов и оставляют в покое. Минимум – 45 минут. Можно и на всю ночь.
Результаты оцениваются визуально. Если реакция отрицательная, эритроциты оседают на дно сферического углубления лунки.
Это должно произойти в обеих лунках с образцами пациента и там, куда были добавлены чистые контрольные эритроциты тест-системы.
При положительном результате, эритроциты не собираются в одном месте, а равномерно распределены по всему дну лунки. Подобная картина должна быть там, где меченые стандартным антигеном эритроциты смешиваются с образцом больного и сывороткой К+. Таким образом проводится контроль реакции, что позволяет избежать ложных результатов.
Количественная оценка РПГА
Образцы с положительным результатом отбирают и несколько раз разводят буферным раствором (титруют). Перед каждым разведением, сыворотку капают в соответствующую лунку планшета и отмечают над ней степень суммарного разведения. Затем к образцам добавляют эритроциты с антигеном трепонемы и определяют, при каком титре еще отмечается положительный результат. Это – количественный анализ крови на сифилис РПГА, он показывает концентрацию антител к возбудителю.
Результаты оценивают так:
- 4+ означает, что эритроциты выстилают дно лунки равномерным слоем. Появление складчатости края говорит о высоких концентрациях антител в исследуемом образце. Реакция положительная.
- 3+ ставят, если круг четкий, но часть эритроцитов «стекает» к центру. Картина напоминает расправленный зонтик, расценивается как положительная реакция.
- 2+ выглядит как широкое кольцо с тенденцией к просветлению в центре. Слабоположительная.
- 1+ означает сомнительный результат. В лунке – узкое колечко. Требует повтора через 1-2 недели.
- При отрицательном анализе, эритроциты формируют пуговку в центре лунки.
Есть, правда, серорезистентные случаи сифилиса, при которых болезни уже вроде бы нет, а антитела сохраняются длительное время. Поэтому РПГА иногда требует подтверждения другими методами.
При необходимости сдать РПГА и пройти любое обследование на сифилис, обращайтесь к грамотным венерологам.
